行業新聞
感受態細胞制備原理及方法
目前, 感受態細胞的制備常用冰預冷的CaCl2處理細菌的方法制備,即用低滲CaCl2溶液在低溫（0℃）時處理快速生長的細菌,從而獲得感受態細菌。此時細菌膨脹成球形,外源 DNA 分子在此條件下易形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附在細菌表面，通過熱激作用促進細胞對DNA的吸收、轉化效率可達106-107轉化子/微克DNA。
操作：
1.取-70℃冰凍菌種,用劃線法接種細菌于培養皿,做好標記,于37℃培養過夜。
2.第二天,從平板上挑取單個菌落,接種至含有3ml LB培養液的試管中,37℃振蕩培養過夜.次日取菌液1ml接種至含有100ml LB培養基的500ml燒瓶中,37℃劇烈震蕩培養約2~3小時（200~300r/min）。
3.當菌落600nm OD值達到0.3-0.4時,將燒瓶取出放置冰上10~15分鐘.在無菌條件下把菌液倒入50ml離心管中.4℃,4000g離心10分鐘。
4.棄上清,將管倒置于干濾紙上1min,吸干殘留的培養液.加10ml 0.1M的CaCl2到離心管中,振蕩混勻,懸浮菌體,冰浴30分鐘。
5.4℃,4000g離心10分鐘,棄上清,將管倒置于干濾紙上1min,吸干殘留的培養液.加4ml冰預冷的0.1M的CaCl2,重懸浮菌體.每管0.2ml分裝,至4℃保存備用,24-48小時內使用效果較好.如果暫時不用,可再保存于-70℃的低溫冰箱中。
更多產品信息可訪問“恒遠生物官網”查詢（http://www.expressioe.cn）上海恒遠生物科技有限公司十幾年來一直致力于打造國際的民族品牌，提供全面的、創新的、優質的、便捷的科研產品和服務。目前，其自主研發的重組蛋白、抗體、ELISA檢測試劑盒得到廣大科研用戶的認可，用恒遠品牌發表的國際SCI文章不計其數，影響因子最高可達17.60。