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Abcam抗體稀釋度的選擇與優化方法
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使用何種稀釋度
抗體和抗原間的結合率取決于親和常數。親和常數可受到溫度、pH和緩沖液成分的影響。改變溶液中抗體和抗原的相對濃度也可控制抗體-抗原復合物形成的程度。由于通常無法改變抗原的濃度，因此必須針對每種應用和每組實驗條件確定各抗體的最佳工作濃度(稀釋度)。
許多Abcam抗體在數據表都有列出不同實驗的推薦稀釋度。我們推薦嘗試用這些稀釋度開始實驗。但是，這些稀釋度可能需要進行某些優化。
優化抗體稀釋度：滴定實驗
zui佳滴度或稀釋度為在最少背景/非特異性結合的情況下得到最佳染色效果的濃度(稀釋度)。必須通過實驗確定每次測定的最佳抗體濃度。通常通過在滴定實驗中使用一系列稀釋度來確定。
當實驗室收到一種新抗體時，建議嘗試用滴定實驗確定最佳抗體稀釋度以獲得最佳結果。
要進行滴定實驗，首先要選擇固定的孵育時間。然后制備一系列實驗稀釋度的抗體以備測試。每種稀釋度應針對相同類型的樣品進行測試，以保持實驗條件標準化。
許多抗體批間性能差別不大，因此您只需要進行一次滴定實驗。但是，多克隆抗血清抗體濃度在不同動物間或不同血清采集時間可能顯著不同。在這些情況下，或者當您注意到任何抗體的批次間染色結果有變化時，我們推薦再次對該瓶抗體進行滴定實驗以獲得最佳濃度。
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