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ELISA“花板”原因總結(jié)
所謂“花板”，就是空白、陰陽性對(duì)照及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，而標(biāo)本孔的OD值卻偏高。“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn)，往往會(huì)給實(shí)驗(yàn)者判讀結(jié)果帶來麻煩。
為了避免“花板”問題的出現(xiàn)，降低檢測的假陽性率，獲得更理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在檢測過程中應(yīng)采取下列措施：
1.在選擇ELISA試劑盒時(shí)，應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便、省時(shí)的試劑。
2.在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測的過程中，所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)的情況下，步驟均按照各種試劑說明書的要求去做，排除實(shí)驗(yàn)所用儀器和操作步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
3.血液標(biāo)本應(yīng)置于室溫下1-2h，使血液凝固收縮，然后離心檢測或讓血液過夜后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮，讓標(biāo)本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽性率降至最低。
4.檢測之前，加大離心轉(zhuǎn)速，盡量延長時(shí)間，使血細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀，讓血細(xì)胞與血清徹底分離。
5.加樣時(shí)不能加入紅細(xì)胞或纖維蛋白，要按照操作說明書去做，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6.對(duì)于血清中存在的紅細(xì)胞或纖維蛋白原，可以在加樣前離心時(shí)得到控制，同樣也可以通過適當(dāng)增加洗滌次數(shù)和浸泡時(shí)間來進(jìn)一步減輕或避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。同樣，對(duì)于血液存在的非特異性的IgG，增加洗滌次數(shù)和延長浸泡時(shí)間也同樣有效。
7.封板溫育時(shí)，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
8.孵育時(shí)間過長，增加了固相載體吸附非特異性蛋白的可能性，也會(huì)造成“花板”。因此，除把握孵育時(shí)間外，在加樣過程中也應(yīng)嚴(yán)格控制時(shí)間，標(biāo)本較多時(shí)可分批操作。
9.手工洗板時(shí)應(yīng)注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出，連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。
10.用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
11.洗液的溫度也會(huì)影響洗板的干凈程度，尤其是冬天溫度過低時(shí)容易出現(xiàn)“花板”問題。
12.洗液要注滿孔，孔壁洗滌不干凈也易造成“花板”現(xiàn)象。
13.洗液要盡量新鮮配制，放置時(shí)間過長易產(chǎn)生絮狀物或渾濁，造成堵孔或花板。
14.有些廠家的ELISA試劑盒顯色液不穩(wěn)定，使用前容易變藍(lán)，如在實(shí)驗(yàn)前不仔細(xì)檢查，很容易導(dǎo)致“花板”現(xiàn)象的發(fā)生，這也提醒實(shí)驗(yàn)者應(yīng)使用新鮮的顯色液，最大程度的保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
上海恒遠(yuǎn)擁有嚴(yán)格的研發(fā)和驗(yàn)證體系，充分保障了產(chǎn)品的良好性能。通過嚴(yán)格的篩選，捕獲抗體和檢測抗體，再進(jìn)行科學(xué)的濃度調(diào)配，形成雙抗體夾心法。通過精心選擇抗體對(duì)、優(yōu)化緩沖液，來保證消除基質(zhì)效應(yīng)，只識(shí)別目標(biāo)分析物，特異性可靠。ELISA試劑盒可以檢測血清、血漿、培養(yǎng)上清、組織等多種樣本。