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恒遠生物|大鼠胚胎心肌細胞H9c2(2-1)培養(yǎng)攻略
品牌: 恒遠生物
貨號: HYCC30031
中文名稱: 大鼠胚胎心肌細胞
規(guī)格: T25
形態(tài)特性: 上皮樣細胞生長
生長特性: 貼壁生長
培養(yǎng)條件:DMEM+10%FBS
傳代方法: 1:2~1:6傳代；2~3天換液1次。
凍存條件: 無血清細胞凍存液
特征特性：該細胞由Kimes B和Brandt B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆得到；表現(xiàn)出許多骨骼肌的特性。這個細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，融合很快發(fā)生。
一、細胞收到后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)某Ｒ娹k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基），若是5%CO2的培養(yǎng)箱，可用密封培養(yǎng)瓶，擰緊瓶蓋后放入5%CO2培養(yǎng)箱，48H內(nèi)要換液一次。
二、細胞培養(yǎng)步驟
1.培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液。
2.無菌PBS或無菌生理鹽水洗滌3次（按培養(yǎng)體積加入）。
3.加入適量胰酶消化適當時間（一般胰酶為0.25%；9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，一次加入1mL胰酶。消化時間視細胞類型等多種情況綜合考慮，一般如果是細胞株，非原代培養(yǎng)，消化1－2分鐘足矣）。
4.用槍頭吹打數(shù)十次（視細胞類型而定。一般細胞株30－50次吧，耗時一般2分鐘左右）。
5. 加入適量體積完全培養(yǎng)基終止胰酶消化（如果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，可以加入1mL完全培養(yǎng)基；現(xiàn)在培養(yǎng)瓶（皿）里有2mL溶液）。
6.現(xiàn)在可以將溶液進行分瓶（2mL）。如果是細胞株，直接均分到兩個培養(yǎng)瓶（皿）里。如果是原代培養(yǎng)，可以根據(jù)消化時間來對細胞進行分離；因此可以將溶液（2mL）都轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶（皿）。
7.將兩個培養(yǎng)瓶（皿）補足完全培養(yǎng)基到正常體積（果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，為5mL完全培養(yǎng)液）。
8.鏡下觀察。剛剛傳代細胞還沒貼壁，懸浮在溶液中，呈圓形。一般2h之內(nèi)會貼壁，如果已經(jīng)貼壁，根據(jù)細胞類型有不同的形態(tài)，但通常都不是圓形。
9.鏡下觀察無誤之后，再放入細胞培養(yǎng)箱。培養(yǎng)瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。
10.傳代之后，最好第二天細胞換液一次。當然，也可以視情況而定。
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