行業(yè)新聞
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的操作步驟你知道嗎
1.基本原理
將質(zhì)粒 DNA 導(dǎo)入細(xì)菌的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)化（ Transformation ）。此感受態(tài)細(xì)菌細(xì)胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀（感受態(tài)細(xì)菌的制備，見(jiàn)前）。質(zhì)粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復(fù)合物黏附于細(xì)菌表面，經(jīng) 42℃ 短時(shí)間熱沖擊處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收 DNA 復(fù)合物。在豐富培養(yǎng)基上生長(zhǎng)數(shù)小時(shí)后，球狀細(xì)胞復(fù)原并分裂增殖。被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中，外源基因得到表達(dá)。在選擇性培養(yǎng)平板上，可選出所需的轉(zhuǎn)化子（即含有質(zhì)粒 DNA 的細(xì)菌）。鈣處理的感受態(tài)細(xì)胞，一般每微克 DNA 能獲得 10 5 ～ 10 6 個(gè)轉(zhuǎn)化子。除化學(xué)方法轉(zhuǎn)化細(xì)菌外，還有電穿孔法（ Electroporation ），其轉(zhuǎn)化率可高達(dá) 10 9 ～ 10 10 個(gè)轉(zhuǎn)化子 /μg 質(zhì)粒 DNA 。
2.器材
①培養(yǎng)皿 ②恒溫培養(yǎng)箱
3.試劑
① LB 培養(yǎng)基
②選擇性 LB 瓊脂培養(yǎng)平板（含氨芐青霉素，終濃度為 50μg/ml ）
③氨芐青霉素 100 mg/ml
④宿主細(xì)菌：經(jīng) 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態(tài)細(xì)菌 DH5α
4.操作步驟
①取 50 μL 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，加入適量質(zhì)粒（體積不得超過(guò) 4 μL ）冰浴 30 min 后， 42℃ 熱激 90 s ，馬上放回冰上，冰浴 2 min ；
②加 400 μL LB 培養(yǎng)基，于 37℃ 搖床慢搖振蕩培養(yǎng) 45-60 min ；
③取 50-100 μL 涂在含有氨芐青霉素（ 100 μg/mL ）的 LB 固體培養(yǎng)基上， 37℃ 倒置培養(yǎng)過(guò)夜。
恒遠(yuǎn)生物擁有一批技術(shù)精湛、經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)工程師，經(jīng)過(guò)多年積累，試劑盒現(xiàn)已涵蓋種屬甚多，上千余種指標(biāo)，有快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，迎合了廣大高校和科研人員的需求，提高了科研人員的工作效率，成熟穩(wěn)定的質(zhì)量，贏得了眾多科研機(jī)構(gòu)的認(rèn)可，完善的庫(kù)存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的技術(shù)指導(dǎo)，保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)。期待您的咨詢。
