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實驗結果不理想？做好這幾點你就是ELISA大神
Elisa實驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。ELISA法由于操作簡略，已被廣泛應用，今天咱們就來談談ELISA試劑盒需把握的關鍵有哪些？
1.在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。一切試劑瓶蓋須蓋緊以避免蒸發和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致呈現錯誤的結果。
2.小心汲取試劑并嚴格遵守給定的孵育時刻和溫度。請注意在汲取標本/規范品，酶結合物或底物時，第一個孔與最后一個孔加樣之間的時刻距離假如太大，將會導致不同的 “預孵育”時刻，然后明顯地影響到測量值的準確性及重復性。
3.試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標簽上的標示為準。
4.濃洗滌液會有鹽分出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5.剛敞開的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對試驗結果造成任何影響。
6.一切的樣品都應管理好，依照規則的程序處理樣品和檢測設備。
通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的第一步，下面簡單介紹一下細胞裂解液樣本及組織勻漿樣本的正確采集、處理方法。
細胞裂解液：
1.吸去培養板內的培養基，用胰酶消化細胞，加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省略。
2.收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。
3.加入適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
4.將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。
5.4℃10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
組織勻漿液：
1.將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質。
2.將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得更充分。
3.將組織按一定的比例加入預冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，檢測后計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數）。
4.吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
注意：保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結果。
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