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谷胱甘肽ELISA測(cè)定實(shí)驗(yàn)完整攻略
簡(jiǎn)介：
谷胱甘肽（glutathione，r-glutamyl cysteingl +glycine，GSH）是一種含γ-酰胺鍵和巰基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成，存在于幾乎身體的每一個(gè)細(xì)胞。谷胱甘肽能幫助保持正常的免疫系統(tǒng)功能，并具有抗氧化作用、整合解毒作用 。半胱氨酸上的巰基為其活性基團(tuán)（故常簡(jiǎn)寫(xiě)為G-SH），易與某些藥物、毒素等結(jié)合，使其具有整合解毒作用。
操作步驟：
一、材料準(zhǔn)備
1. 包被液：0.05 mol/l（pH9.6）碳酸鹽緩沖液：Na2CO3 0.159 g，NaHCO3 0.294 g，用蒸餾水溶解后，定容至100 ml。
2. PBS-T洗滌液：0.01mol/ pH7.4磷酸鹽-氯化鈉緩沖液：NaCl 8.0 g，KH2PO4 0.2 g，Na2HPO4·12H2O 2.9 g，KCl 0.2 g，吐溫-20 0.5 ml，用蒸餾水溶解后，定容至1000 ml。
3. 底物溶液3，3’，5,5‘-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）貯存液及應(yīng)用液：
（1）0.1 mol/l pH6.8 PBS：Na2HPO4·12H2O 1.09 g，NaH2PO4·H2O 6.05 g，蒸餾水溶解后定容至500 ml，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
（2）TMB貯備液：TMB 60 mg 溶于10 ml 二甲基亞砜（DMSO）中4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
（3）TMB應(yīng)用液：臨用前取0.1 mol/l pH6.0 PBS 10 ml，TMB貯備液100 ul，30%H2O2 15 ul 混勻即可。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 抗體包被
（1）抗體用包被液稀釋至20 ug/ml，加入聚苯乙烯反應(yīng)板中每孔100 ul，加蓋后放4℃過(guò)夜。
（2）傾去孔內(nèi)液體，加入洗滌液后靜置3 min，傾盡洗滌液，重復(fù)洗滌3次。
（3）將反應(yīng)板口在吸水紙上，以除盡液體。
2. 封閉：每孔加入200 ul封閉液，37℃孵育60 min，然后洗滌3次。
3. 加入待測(cè)血清，37℃溫育1~2 h，洗滌3次。用稀釋液作對(duì)照孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備是用不容稀釋度的純GST-π。
4. 加酶標(biāo)抗體：按要求稀釋抗GST-π-IgG-HRP，每孔100 ul，37℃溫育1 h，然后洗滌5次，扣在吸水紙上吸干水分。
5. 顯色：加入TMB應(yīng)用液，置室溫反應(yīng)15~30 min，加入50 ul 2 mol/l H2SO4，穩(wěn)定3~5 min，即可比色。
6. 比色：用酶標(biāo)儀，以PBS-T孔為對(duì)照，波長(zhǎng)450 nm，測(cè)各孔光吸收度（A），查標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可測(cè)得GST-π含量。
參考文獻(xiàn)：
1.【文獻(xiàn)標(biāo)題】Tissue engineered artificial liver model based on viscoelastic hyaluronan-collagen hydrogel and the effect of EGCG intervention on ALD
2.【文獻(xiàn)標(biāo)題】Analysis of the effect of probucol-mecobalamin tablets combination on oxidative stress in patients with diabetic peripheral neuropathy
3.【文獻(xiàn)標(biāo)題】Effects of sublethal concentrations of cyantraniliprole on the biology and metabolic enzyme activities of Laodelphax striatellus (Fall′en)